甲状腺眼病（TED）或甲状腺相关眼病（TAO），又称格雷夫斯眼病（GO），是与甲状腺疾病密切相关的一种器官特异自身免疫性疾病，位居成人眼眶疾病发病率首位，也是弥漫性毒性甲状腺肿（GD）最常见的甲状腺外表现，亦可见于慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者、少数甲状腺功能减退患者和甲状腺功能正常人群。TED 的临床表现复杂，可引起单眼或双眼睑退缩、眼球突出、复视、限制性斜视、暴露性角膜病变和 TED 视神经病变（DON）等，严重影响患者的生活质量。
替妥木单抗（Teprotumumab-trbw，商品名TEPEZZATM）是一种靶向 IGF-1R 的抑制剂，可通过阻断眼眶组织中TSHR和IGF-1R复合物下游信号通路，进而缓解疾病进展，从而改善眼部症状和体征，可使患者免于需要多次侵入性手术或放射治疗。
小牛医药已完成替妥木单抗人血清药物浓度检测分析方法开发和验证，正在全面投身于该项目的全程临床运营管理及医学事务。
一、检测物质参考依据
- 9012生物样品定量分析方法验证指导原则（2020 年《中华人民共和国药典》）
- M10：生物分析方法验证及样品分析（2022 年 05 月 24 日）
- 药物临床试验生物样本分析实验室管理指南（试行）（2011 年 12 月 02日）
二、检测物质基本信息
- 中文名称：替妥木单抗
- 英文名称：Teprotumumab-trbw
- 商品名称：TEPEZZATM
- 分子量（Da)：148240.0938
- 性状：溶液
三、分析方法基本信息
| 检测方法 | 酶联免疫分析法 |
| 检测物质 | 替妥木单抗 |
| 最小稀释倍数(MRD) | 20 |
| 生物基质 | 血清 |
| 生物基质用量 | 12μL |
| 线性范围 | 10ng/mL~3200ng/mL |
四、分析方法难点
① 灵敏度要求高
给药浓度最低0.1mg/Kg，血药浓度低，且需要检测到3个半衰期后的血药浓度，对灵敏度要求高。针对上述问题我们通过选用更高结合效率的蛋白，优化蛋白比例，显著改善了检测灵敏度。
② 内源性干扰大
替妥木单抗作为靶向IGF-1R的抗体蛋白，与IGF-1竞争结合IGF-1R靶点，IGF-1可能会干扰替妥木单抗的检测。针对上述问题，我们通过定制替妥木单抗抗体蛋白精准与替妥木单抗结合，排除干扰。
五、杭州小牛医药科技有限公司中心实验室
中心实验室占地约500平米，所有区域均配备温湿度监控设备和温湿度调控设备。实验室涵盖了多个分析检测平台，包括：
- 小分子检测平台：以高分辨质谱为平台，可以高通量分析复杂生物机制样本。
- 大分子检测平台：以ELISA、MSD、SIMOA为平台，可开展治疗性生物制品蛋白与单细胞水平全域灵敏度需求的分析服务，以及生物标志物、受体占位、靶点分析等药效学检测服务。
- 免疫原性研究平台：基于蛋白分析和细胞分析平台，可提供抗药抗体和中和抗体检测解决方案。
- 细胞培养平台：基于细胞房，可以提供常规细胞的培养、传代、冻存、复苏以及基于细胞开展各类实验。
六、仪器介绍
1）超敏电化学发光技术（MSD）：是一种用途广泛的生物检验设备，基于酶联免疫分析法,加之三联嘧啶钌发光强度来进行定性或定量分析。是一种结合经典免疫学与电化学的第三代免疫分析技术的检测方法。可用于疾病标志物测定、单克隆抗体筛分、凝血分、抗生素灵敏度、药物临床毒理评估、药效评估等多个方面，具有以下特点：
- 灵敏度高：基于电化学发光原理，比常规免疫分析技术提高100灵敏度，常规灵敏度可达0.05pg/ml，极限灵敏度达到fg/ml。
- 另外还具有线性范围宽、样本用量低、重现性高、载量载体高。
2）多功能酶标仪：可广泛应用于基础研究、药物发现、质量质控、生物鉴定和生产制备等各个领域。其具有光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光和荧光偏振等五种检测模式。
3）荧光及化学发光成像系统：拥有深度制冷CCD相机、高灵敏度镜头，可广泛应用在核酸、蛋白样品检测、免染成像技术、化学发光检测、多色荧光检测等方向。
4）高分辨液质联用仪：其拥有新型大容量离子传输管及电动离子漏斗结构，极大提升了质谱的离子传输效率及灵敏度；通过优化扫描时间配置提升质谱扫描频率 (40 HZ) 配合上高级峰值算法 (APD)，极大提升蛋白质鉴定通量及数据准确性；通过一系列的硬件软件优化，对TMT定量，生物标志物认证及高分辨平行反应监测都有极大的提升。可广泛应用于PRM靶向定量蛋白组、靶标代谢流分析、多肽组学、DIA定量蛋白质组学、肠道菌群非靶标代谢组学、定量蛋白质组学等。
5）多通道纳喷离子源：可搭配高分辨液质联用仪使用。原理是通过成像技术和数码控制，精确定位样品采样点，用一滴溶剂对样品或组织进行表面微萃取，萃取液经由基于芯片的纳升电喷雾离子化(Chip‐based nanoESI)，进行串联质谱或高分辨质谱分析。
6）全自动多重数字免疫分析系统Simoa：即分子免疫阵列，是一种将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测方法。该技术检测限可达飞克（fg/mL）级，是目前最具代表性的单分子免疫检测技术。其原理是基于微阵列芯片的单分子免疫检测，在毫米级芯片上雕刻微米级微井，每个微井体积约 40 fL 左右，随后将免疫复合物磁珠分配于微井中，再借助高分辨率荧光显微镜对荧光点进行计数，依据泊松分布理论，计算同时含珠子与荧光产物孔的数量与含珠子孔总数的比值，以此确定测试样品中的蛋白质浓度。可以直接对血清、血浆等体液中蛋白进行fg级别的超高灵敏度检测。该技术目前应用于肿瘤，神经、感染性疾病、免疫炎症、生殖、眼科、心血管等。其优势有：灵敏度高、样本用量少、全自动化、高精确度、线性范围广等优点。
